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固相萃取10大秘訣

更新時間:2021-06-10瀏覽:2522次

 

固相萃取10大秘訣

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1. 了解你的化合物! ?

被分析化合物的特性對可以執(zhí)行的SPE類型有很大影響(請查閱我們的SPE指南,聯(lián)系北京亙辰科技索要資料)。兩個最重要的值是目標分析物的pKaLog P:?
pKa = 分析物一半電離一半未電離的點。
Log P = 化合物疏水性的量度。

2. 優(yōu)化上樣pH ?

pH 值對任何SPE方法都有很大影響,可用于優(yōu)化化合物在SPE產(chǎn)品上的保留。
例如,反相方法調(diào)節(jié)pH值以中和分析物上的任何電荷。
這將使它們更具疏水性,提高與樹脂的相互作用。對于酸性化合物,將pH值調(diào)節(jié)2個單位低于pKa;對于堿性化合物,將pH值調(diào)節(jié)2個單位高于pKa。
 
3. 優(yōu)化洗滌和洗脫強度
當時用混合模式或反相SPE產(chǎn)品時,可以調(diào)整洗滌和洗脫強度,以獲得最
干凈的提取物。Log P是一個很好的屬性,可幫助您決定如何設(shè)置。
Log P-在洗滌步驟中使用更強的有機強度。
Log P-降低洗脫溶劑的有機強度,以抑制疏水干擾,同時仍能洗脫所選分析物。
 
 4.  新鮮的標準是*!
一些分析物很容易因熱和光而降解,并且在長期存儲時會從溶液中沉淀出來。這將影響校準標準和回收率值。在開始之前,請使用新制定的標準開始您的程序。
 
5. 了解你的吸附劑! ?
找出您正在使用的吸附劑的pKa,并將其與您的分析物pKa一起使用,在上樣和洗滌步驟中調(diào)節(jié)溶液的pH值,無需去離子化合物和樹脂(僅限弱離子樹脂)。?
 
6. 吸附劑調(diào)節(jié)
既然您知道了吸附劑的pKa(步驟5),您的吸附劑床就可以被激活并準備好通過調(diào)節(jié)來結(jié)合分析物。在大多數(shù)基于硅膠的SPE吸附劑中,硅膠與官能化部分鍵合,該部分通常平放在顆粒表面。
 
調(diào)節(jié)步驟(使用與水混溶的有機溶劑,例如MeOH)使這些鍵合的官能團“豎立”在顆粒的頂部,為它們提供最大的表面積,讓感興趣的分析物相互作用/結(jié)合。如果吸附劑是水可濕性的,則可能不需要此步驟,但它可以通過對吸附劑床進行溶劑洗滌來提高提取物的清潔度。
 
7. 順其自然(流速)
流速對于成功的反相SPE工作流程很重要。保留機制在很大程度上依賴于吸附劑和目標分析物之間相互作用的范德華力。SPE過程中的快速流速會降低目標分析物與吸附劑介質(zhì)正確結(jié)合的能力,并可能導致SPE方法的上樣和洗滌步驟出現(xiàn)突破。緩慢而穩(wěn)定的樣品流為最佳。以小于或等于每秒1滴(~1毫升/分鐘)的流速為目標。
 
8.松散包裝與復合
松散填充的材料會對吸附劑床造成許多問題,包括溝流、壓縮、空隙以及由于松散填充后頂部玻璃料缺乏壓縮而導致的床重與床高比差異的不一致(圖1.)。所有這些因素都會對測試的回收率和再現(xiàn)性產(chǎn)生負面影響??紤]Microlute@ CP系列這樣的復合產(chǎn)品,這些產(chǎn)品旨在消除這些問題并提高SPE方法的回收率和重現(xiàn)性。
Figure 1. MicroluteTM CP, 復合吸附劑與傳統(tǒng)松散填充SPE
 
9. 洗脫前干燥SPE樹脂
二氧化硅在干燥時非常容易受到固定相塌陷的影響。在完成SPE程序的最
后洗滌步驟之前,不要讓二氧化硅基樹脂在任何時候變干——在上樣步驟
中尤其如此。這通過限制分析物和鍵合相之間可能的相互作用來防止回收
率降低。
以下提示適用于聚合物樹脂和二氧化硅樹脂:
  • 執(zhí)行清潔步驟后,確保使用真空或正壓干燥樹脂,直到樹脂*干燥(我們建議使用正壓/真空至少3分鐘)或直到看不到清洗溶劑。
  • 如果您的方法需要干燥和重構(gòu)步驟,干燥樹脂會顯著縮短干燥時間,大多數(shù)洗滌溶劑中都存在水,水比大多數(shù)有機溶劑更難蒸發(fā)。
  • 如果您的方法不需要干燥步驟,則在洗滌步驟后不干燥SPE樹脂會導致最終進樣溶液的濃度降低,從而導致靈敏度降低。
 
10.   最佳干燥
確保您的干燥方法足夠有力以明顯擾亂洗脫溶劑的表面,但不至于導致將溶液從孔中排出的可能性,因為這會導致嚴重的RSD%和回收率差異。
這可能非常困難,因為溶劑水平會在干燥過程中移動。為了克服這個問題,使用可以編程或自動調(diào)整以實現(xiàn)高效溶劑蒸發(fā)的蒸發(fā)器,例如Porvair Sciences Ultravap@系列蒸發(fā)器,它可以在整個過程的所有階段優(yōu)化干燥,而沒有任何樣品污染的風險。
 
 

 

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